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發布日期︰2020-01-29 作者︰ 點擊︰

不同工藝山茶油中生物活性物質含量的比較


譚傳波1,田 華1,賴瓊瑋1,周剛平1,楊耀學1,陳勁松1,吳美芳2,謝妍2
(1.湖南大三湘茶油股份有限公司,湖南 衡陽 421141; 2.長沙理工大學 化學與生物工程學院,長沙 410114)


摘要︰以不同工藝(冷榨法、熱榨法、超臨界CO2萃取法、水黴法、浸出法、鮮榨法)山茶油為研究對象,研究了其多酚、黃酮、原花青素、總三 和木脂素含量。結果表明︰冷榨毛油中多酚、黃酮、原花青素、木脂素和總三 含量高于浸出毛油;超臨界CO2萃取山茶油和水黴法山茶油中多酚、黃酮、總三 和木脂素含量較高;鮮榨山茶油中多酚、黃酮、原花青素、木脂素和總三 含量分別為271.6、157.2、1 400.0、180.0 mg/kg和12.5 mg/g,均遠高于其他工藝。鮮榨山茶油是一種高品質食用油,具有廣闊的食用和藥用價值。
關鍵詞︰山茶油;鮮榨山茶油;多酚;黃酮;原花青素;總三 ;木脂素
中圖分類號︰TS225.1;TQ646.4  文獻標識碼︰A    文章編號︰1003-7969(2018)12-0041-05


Comparison of contents of bioactive substances in oil-tea 
camellia seed oils from different processes 
TAN Chuanbo1, TIAN Hua1, LAI Qiongwei1, ZHOU Gangping1, YANG Yaoxue1, 
CHEN Jinsong1, WU Meifang2, XIE Yanyi2
(1.Hunan Great Sanxiang Camellia Oil Co.,Ltd., Hengyang 421141, Hunan, China; 2.School of Chemistry 
and Bio-Engineering, Changsha University of Science & Technology, Changsha 410114, China)


Abstract︰With oil-tea camellia seed oils from different processes (cold pressing, hot pressing, solvent extraction, supercritical CO2 extraction, fresh pressing and aqueous enzymatic extraction) as research objects, the contents of polyphenols, flavonoids, procyaninides, total triterpenoids and lignins were studied. The results showed that the contents of polyphenols, flavonoids, procyaninides, total triterpenoids and lignins in crude cold pressed oil were higher than those in crude solvent extracted oil. The contents of polyphenols, flavonoids, total triterpenoids and lignins in oil-tea camellia seed oils extracted by supercritical CO2 and aqueous enzymatic method were higher. The contents of polyphenols, flavonoids, procyaninides, lignins and total triterpenoids in fresh pressed oil-tea camellia seed oil were 271.6, 157.2, 1 400.0, 180.0 mg/kg and 12 5 mg/g, which were far higher than those in the other five processes. The fresh pressed oil-tea camellia seed oil was a kind of high-quality edible oil, and had wide edible and medicinal value. 
Key words︰oil-tea camellia seed oil;fresh pressed oil-tea camellia seed oil; polyphenols; flavonoids; procyaninides; total triterpenoids; lignins



  山茶油含有油酸、亞油酸、亞麻酸、生育酚、植物甾醇和角鯊烯等營養物質,長期食用,具有降低膽固醇、預防心血管疾病的作用[1-3]。目前,山茶油提取工藝有熱榨法、浸出法、超臨界流體萃取法、水黴法和冷榨法,這些工藝要求山茶籽水分含量低,因此山茶籽需要經過自然晾曬或機械干燥降低水分,在此期間山茶籽由于熱效應和自身呼吸作用品質下降,熱榨法和浸出法得到的山茶毛油必須經過精煉工藝才能達到食
用要求,山茶油中營養物質也遭到嚴重破壞。
     天然生物活性物質如多酚具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗輻射、調節血脂、防治動脈粥樣硬化、抗病毒等藥理學活性[4-6];黃酮具有抗腫瘤、抗心血管疾病、抗炎、提高免疫力、抗病毒、抗氧化等藥理學活性[7-9];原花青素具有調節免疫與抗炎、護肝降脂、保護腸道損傷、防治動脈粥樣硬化、抗紫外線、保護視神經、抗氧化等藥理學活性[10-12];三 類化合物(以下簡稱總三 )具有廣泛的生理活性,即保肝、抗腫瘤、抗HIV-1及HIV-1蛋白黴活性、抗帶狀皰疹病毒及增加免疫力等諸多功效[13-14];木脂素具有抗氧化、抗腫瘤、護肝等藥理學活性[15-16]。本研究以不同工藝山茶油為研究對象,測定其天然活性物質多酚、黃酮、原花青素、總三 和木脂素含量,以期為獲得鮮榨山茶油的全面價值提供指導。
1 材料與方法
1.1 實驗材料
     新鮮山茶果︰水分55%,取自湖南大三湘茶油股份有限公司;食品級提取液(以下簡稱提取液)︰市購,無毒害,且不與漿液體系發生化學反應;多酚標準品(UV級,純度≧98%);α-澱粉黴(枯草桿菌,BR,4 000 U/g);酸性蛋白黴(BR,50 U/mg);縴維素黴(綠色木霉, BR,50 U/mg);果膠黴(BR,500 U/mg);蘆丁標準品(HPLC級,純度≧98%);原花青素標準品(UV級,純度≧95%);熊果酸標準品(HPLC級,純度≧98%);亞麻木酚素標準品(HPLC級,純度≧98%);福林酚溶液︰上海源葉生物科技有限公司;蒸餾水;其他試劑均為分析純。
     MS205DU型電子天平︰梅特勒-托利多(常州)測量技術有限公司;T6新世紀紫外分光光度計︰北京普析通用儀器有限責任公司;WBS-11恆溫水浴鍋;SHDL-DZF6020D干燥箱;H-1850高速離心機︰上海利鑫堅離心機有限公司;YF-J503家用榨油機︰東莞市房太電器有限公司;多功能粉碎機︰上海廣沙工貿有限公司;HA120-50-01型超臨界萃取裝置︰江甦南通華安超臨界萃取有限公司。
1.2 實驗方法
1.2.1 山茶油的提取
     浸出法制油︰新鮮山茶果機械剝殼後得到新鮮山茶籽,在60 ℃鼓風烘干36 h後水分達到10%,脫除籽殼,粉碎,過100目分析篩,稱取100 g過篩山茶籽仁粉加入500 mL石油醚(30~60 ℃)在90 ℃下冷凝回流進行萃取40 min,過濾收集清液,濾渣再加入500 mL石油醚重復前面操作步驟,合並清液,在溫度50 ℃、真空度0.1 MPa下旋蒸至無溶劑滴下,得到浸出毛油。
     熱榨法制油︰新鮮山茶果機械剝殼後得到新鮮山茶籽,在60 ℃鼓風烘干36 h後水分達到10%,脫除籽殼,粉碎,過100目分析篩,將過篩山茶籽仁粉加入少量粉碎籽殼在軸芯溫度130 ℃下壓榨得到熱榨毛油。
     水黴法制油︰新鮮山茶果機械剝殼後得到新鮮山茶籽,在60 ℃鼓風烘干36 h後水分達到10%,脫除籽殼,粉碎,過100目分析篩,稱取100 g過篩山茶籽仁粉,在料液比1: 5、pH 6.0、60 ℃下加入料液體系質量1%α-澱粉黴、1%縴維素黴和1%果膠黴,黴解2 h後再加入料液體系質量2%酸性蛋白黴黴解2 h,離心,收集上清油相,得到水黴法山茶油。
     冷榨法制油︰新鮮山茶果機械剝殼後得到新鮮山茶籽,在60 ℃鼓風烘干36 h後水分達到10%,脫除籽殼,粉碎,過100目分析篩,將過篩山茶籽仁粉加入少量粉碎籽殼控制出餅溫度60 ℃下壓榨得到冷榨毛油。
     超臨界CO2萃取制油︰新鮮山茶果機械剝殼後得到新鮮山茶籽,在60 ℃鼓風烘干36 h後水分達到10%,脫除籽殼,粉碎,過100目分析篩,稱取1 kg過篩山茶籽仁粉,在萃取壓力30 MPa、萃取溫度45 ℃條件下萃取1.5 h,得到超臨界CO2萃取山茶油。
     鮮榨山茶油︰新鮮茶果機械脫殼後得到新鮮山茶籽,水洗後直接進行壓榨得到山茶籽漿液,將山茶籽漿液在90 ℃下按照料液比4: 1(山茶籽漿液的質量與提取液的體積比)加入無毒害且不與漿液體系發生化學反應的食品級提取液提取40 min,後進行油脂分離得到鮮榨山茶毛油,再經脫水和過濾得到鮮榨山茶油。
1.2.2 山茶油中多酚、黃酮和原花青素提取
     稱取10 g山茶油于燒瓶中(精確到0.000 1 g),加入20 mL 60%乙醇溶液,在70 ℃下攪拌萃取1 h,離心,收集上清液,將山茶油再次用20 mL 60%乙醇溶液,在70 ℃下攪拌萃取1 h,離心,收集上清液,合並兩次上清液並轉移至50 mL容量瓶中,用60%乙醇溶液定容,待測。
1.2.3 山茶油中總三 和木脂素提取
     稱取3 g山茶油于燒瓶中(精確到0.000 1 g),加入20 mL無水乙醇,在70 ℃下攪拌萃取1 h,離心,收集上清液,將山茶油再次用20 mL無水乙醇,在70 ℃下攪拌萃取1 h,離心,收集上清液,合並兩次上清液並轉移至50 mL容量瓶中,用無水乙醇定容,待測。
1.2.4 多酚含量測定
     標準曲線制作︰將多酚標準品用60%乙醇溶液溶解,並制備20、40、60、80、100 μg/mL的標準梯度溶液,吸取1 mL各標準梯度溶液分別置于10 mL容量瓶中,分別加入1 mL福林酚溶液和2 mL 7.5%碳酸鈉溶
液,搖勻,用蒸餾水定容至刻度,室溫反應1 h,在波長760 nm處測定吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,多酚標準溶液質量濃度(X)為橫坐標,繪制標準曲線,回歸方程為︰A=0.008 5X-0.101 4(R2=0.990 5)。
     樣品檢測︰吸取1 mL待測溶液,按照標準曲線測定方法,測定其在波長760 nm處吸光度,根據吸光度在標準曲線上找出對應的質量濃度並計算多酚含量。
1.2.5 黃酮含量測定 
     標準曲線制作︰將蘆丁標準品用60%乙醇溶液溶解,並制備20、40、80、120、160 μg/mL的標準梯度溶液,吸取1 mL各標準梯度溶液分別置于25 mL容量瓶中,分別用60%乙醇溶液加至10 mL,加入1 mL 5%亞硝酸鈉溶液,搖勻,放置6 min,再加入1 mL 10%硝酸鋁溶液,6 min後加入10 mL 4%氫氧化鈉溶液,混勻,再用60%乙醇溶液定容至刻度,搖勻,放置15 min後在波長510 nm處測定吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,蘆丁標準溶液質量濃度(X)為橫坐標,繪制標準曲線,回歸方程為︰A=0.000 5X+0.001 2(R2=0.993 1)。
     樣品檢測︰吸取3 mL待測溶液,按照標準曲線的測定方法,測定其在波長510 nm處吸光度,根據吸光度在標準曲線上找出對應的質量濃度並計算黃酮含量。
1.2.6 原花青素含量測定
     標準曲線制作︰將原花青素標準品用50%甲醇溶液溶解,並制備10、20、40、60、80 μg/mL的標準梯度溶液,吸取1 mL各標準梯度溶液分別置于10 mL具塞錐瓶中,分別加入6 mL正丁醇-鹽酸(95: 5)混合液,再加入0.2 mL 2%硫酸鐵銨溶液(用2 mmol/L鹽酸配成2%的溶液),混勻,置沸水浴回流加熱40 min後,立即置于冰水浴冷卻2 min,取出後室溫放置10 min,于波長546 nm處測定吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,原花青素標準溶液質量濃度(X)為橫坐標,繪制標準曲線,回歸方程為︰A=0.004 1X+0.026 9(R2=0.998 4)。
     樣品檢測︰吸取1 mL待測溶液稀釋10倍,再取1 mL稀釋10倍後的待測液,按照標準曲線測定方法,測定其在波長546 nm處的吸光度,根據吸光度在標準曲線上找出對應的質量濃度並計算原花青素含量。
1.2.7 總三 含量測定
     標準曲線制作︰將熊果酸標準品用無水乙醇溶解,並制備1、2、4、6、8 μg/mL的標準梯度溶液,吸取1 mL各標準梯度溶液分別置于10 mL具塞比色管中,再置于沸水浴中揮干溶劑,分別加入0.4 mL 5%香蘭素溶液(5 g香蘭素溶于100 mL冰醋酸)和1 mL高氯酸,混勻,再置于60 ℃水浴加熱15 min,取出置于冰水浴2 min,加入3.6 mL冰醋酸,混勻,室溫放置10 min,于波長545 nm處測定吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,熊果酸標準溶液質量濃度(X)為橫坐標,繪制標準曲線,回歸方程為︰A=0 061 5X+0.160 2(R2=0.997 8)。
     樣品檢測︰吸取1 mL待測溶液稀釋100倍,再取0.5 mL稀釋100倍後的待測液,按照標準曲線測定方法,測定其在波長545 nm處的吸光度,根據吸光度在標準曲線上找出對應的質量濃度並計算總三 含量。
1.2.8 木脂素含量測定
     標準曲線制作︰將亞麻木酚素標準品用無水乙醇溶解,並制備10、20、40、60、80 μg/mL的標準梯度溶液,于波長280 nm處測定吸光度,以吸光度(A)為縱坐標,亞麻木酚素標準溶液質量濃度(X)為橫坐標,繪制標準曲線,回歸方程為︰A=0.008 1X+0.030 8(R2=0.994 8)。
     樣品檢測︰將待測溶液于280 nm處測定吸光度,根據吸光度在標準曲線上找出對應的質量濃度並計算含量。
2 結果與分析
2.1 不同工藝山茶油多酚含量(見表1)

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由表1可知,鮮榨山茶油中多酚含量為271.6 mg/kg,遠高于其他工藝;浸出毛油中多酚含量最低,可能因為多酚極性比石油醚大而沒有大量溶出;熱榨毛油多酚含量低于冷榨毛油,可能因為熱榨溫度高,多酚發生氧化;冷榨毛油因為壓榨溫度低,多酚含量高于熱榨毛油和浸出毛油;超臨界CO2萃取山茶油和水黴法山茶油中多酚含量高于冷榨毛油、熱榨毛油和浸出毛油。
2.2 不同工藝山茶油黃酮含量(見表2)

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由表2可知,鮮榨山茶油中黃酮含量為157.2 mg/kg,遠高于其他工藝;浸出毛油中黃酮含量最低,可能因為黃酮極性比石油醚大而沒有大量溶出;熱榨毛油黃酮含量低于冷榨毛油,可能因為熱榨溫度高,黃酮發生氧化;冷榨毛油因為壓榨溫度低,黃酮含量高于熱榨毛油和浸出毛油;超臨界CO2萃取山茶油和水黴法山茶油中黃酮含量高于冷榨毛油、熱榨毛油和浸出毛油。
2.3 不同工藝山茶油原花青素含量(見表3)

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由表3可知,鮮榨山茶油中原花青素含量為1 400.0 mg/kg,遠高于其他工藝;冷榨毛油和熱榨毛油中原花青素含量高于浸出毛油、水黴法山茶油和超臨界CO2萃取山茶油,可能因為摻入少量粉碎籽殼所致,原花青素主要來源于籽殼;水黴法山茶油中原花青素含量較低,可能是茶籽完全脫除籽殼,另外原花青素在水中溶解度較小而沒有被大量提取出來;超臨界CO2萃取山茶油中原花青素含量高于水黴法,說明相比水黴法,超臨界CO2萃取有利于原花青素的溶出。
2.4 不同工藝山茶油總三 含量(見表4)

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由表4可知,鮮榨山茶油中總三 含量為12.5 mg/g,遠高于其他工藝;浸出毛油和熱榨毛油中總三 含量低;水黴法山茶油中總三 含量與冷榨毛油相近;超臨界CO2萃取山茶油中總三 含量較高,說明超臨界CO2萃取有利于弱極性的總三 和非極性的油脂一起溶出。
2.5 不同工藝山茶油木脂素含量(見表5)

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由表5可知,鮮榨山茶油中木脂素含量為180 0 mg/kg,遠高于其他工藝;浸出毛油和熱榨毛油中木脂素含量低;冷榨毛油因為壓榨溫度低,所以木脂素含量較高;水黴法山茶油中木脂素含量與冷榨毛油相近;超臨界CO2萃取山茶油中木脂素含量較高,說明超臨界CO2萃取有利于弱極性的木脂素和非極性的油脂一起溶出。
3 結 論
     冷榨毛油中多酚、黃酮、原花青素、總三 和木脂素含量高于浸出毛油,冷榨生產山茶油工藝具有廣闊的市場應用前景。
     超臨界CO2萃取山茶油和水黴法山茶油中多酚、黃酮、總三 和木脂素含量較高。
     鮮榨山茶油中多酚、黃酮、原花青素、木脂素和總三 含量分別為271.6、157.2、1 400.0、180.0 mg/kg和12.5 mg/g,均遠高于其他工藝,說明鮮榨山茶油是一種高品質食用油,且食用和藥用價值廣闊。
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